MCI®GEL CRSシリーズ光学分割用カラム
MCI®GEL CRSシリーズはアミノ酸・ヒドロキシカルボン酸の光学分割に適したHPLC充填カラムです。
分離のメカニズム
MCI®GEL CRS10W / CRS 15Wカラムは、逆相用シリカゲル表面に、新たに開発した光学活性リガンドが修飾され、固定相として機能します
試料分子は、移動相に添加された銅(Ⅱ)イオンを介して光学活性リガンドと相互作用することにより光学認識され、同時に疎水相互作用による保持で精密に分離されます。
CRS10W と CRS15Wでは修飾された光学活性リガンドが光学異性体の関係にあり、通常の分析では、CRS10Wが使用されます。
CRSシリーズは分析専用のカラムです。分取あるいはそれ以上のスケールアップはできません。
CRS10Wでのアミノ酸の保持のめやす
| アミノ酸 | 溶離液 CuSO4mM |
流速 mL/min |
保持時間 (L体)min |
分離係数 α |
分離度 Rs |
|
|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | Orn·HCl | 0.1 | 0.2 | 6.8 | 1.26 | <1 |
| 2 | Lys·HCl | 0.1 | 0.2 | 7.7 | 1.45 | <1 |
| 3 | Ala | 0.1 | 0.5 | 11.0 | 1.39 | 1.4 |
| 4 | His·HCl | 0.1 | 0.5 | 10.5 | 1.63 | 1.7 |
| 5 | Ser | 0.1 | 0.5 | 10.1 | 1.25 | 1.0 |
| 6 | Thr | 0.1 | 0.5 | 11.3 | 1.29 | 1.3 |
| 7 | Cit | 0.5 | 0.5 | 10.4 | 1.75 | 2.3 |
| 8 | Hyp | 1.0 | 0.2 | 23.8 | 1.23 | 1.1 |
| 9 | Pro | 1.0 | 1.0 | 7.3 | 2.13 | 4.5 |
| 10 | Val | 1.0 | 1.0 | 8.9 | 2.04 | 5.0 |
| 11 | Nval | 1.0 | 1.0 | 11.5 | 2.07 | 4.7 |
| 12 | Asp | 2.0 | 0.5 | 13.2 | 1.18 | 0.8 |
| 13 | Glu | 2.0 | 1.0 | 16.2 | 1.54 | 2.3 |
| 14 | Ileu(DL) | 2.0 | 0.5 | 30.4 | 2.14 | 6.5 |
| 15 | Ileu(allo) | 2.0 | 0.5 | 21.9 | 1.97 | 6.0 |
| 16 | Leu | 2.0 | 1.0 | 14.6 | 1.97 | 4.6 |
| 17 | Nleu | 2.0 | 1.0 | 24.1 | 2.16 | 6.5 |
| 18 | Met | 2.0 | 1.0 | 10.3 | 1.64 | 2.6 |
| 19 | Tyr | 2.0 | 1.0 | 22.5 | 1.85 | 5.3 |
| 20 | Eth | 2.0 | 1.0 | 26.4 | 1.69 | 5.0 |
| 21 | Phe | 2.0 | 1.0 | 37.8 | 1.84 | 6.3 |
使用上のご注意
- カラムの平衡化には多少時間がかかりますので、2-3時間を目安としてコンディショニングした後、分析を開始してください。
- 親水性アミノ酸の分析では、流速を小さくする(0.2-0.3 mL/min)と分離が向上します。
- 疎水性アミノ酸の分析では、移動相にメタノールあるいはアセトニトリルを少量(最大15%)添加すると溶離が早まり分離が向上します。
- 有機溶媒や高濃度の水性有機溶媒をカラムに流さないでください。固定相が劣化し分離能が失われます。1台のHPLC装置で逆相あるいは順相クロマトモードの分析と共用する場合には、特に注意が必要です。
- 酸またはアルカリ添加による移動相のpH調整や、緩衝液の使用は避けて下さい。銅(Ⅱ)イオンの沈殿がおこり、カラムの閉塞による分離能が低下します。
- カラムは一度劣化すると回生はできません。
